服务概述Service Process
双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescent Complimentary，BiFC）技术基于蛋白质片段互补的原理，用于研究蛋白质间的相互作用。其原理是将荧光蛋白（如绿色荧光蛋白GFP、黄色荧光蛋白YFP等）切割为两个互补但各自不发光的片段（如N端和C端片段），分别与待检测的蛋白质A和B融合表达。当蛋白质A与蛋白质B在细胞内发生相互作用时，荧光蛋白片段靠近并重组为完整的荧光蛋白，从而在显微镜下产生荧光信号，直观地反映了蛋白质间的相互作用。
服务优势Our Strengths
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01
- 活细胞内检测
- 能够在细胞生理状态下直接观察蛋白质相互作用，保留了时空动态信息
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02
- 高特异性
- 只有当目标蛋白相互作用时，荧光信号才会出现，减少了假阳性结果，提高了检测的特异性
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03
- 检测弱或瞬时相互作用
- 对低亲和力、短暂相互作用敏感，能够揭示一些传统方法难以检测到的相互作用
服务流程Service Process
1
接收订单及样品
→
2
构建融合蛋白
→
3
细胞转染
→
4
荧光观察
→
5
结果交付
客户提供Sample Requirements
蛋白序列信息
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- 客⼾提供载体/模板：需要提供载体mcs测序报告/模板测序结果，如⽆测序报告则需另外收取测序费⽤，由⾦开瑞代为测序
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- 客⼾提供菌液：菌液量应≥0.5mL，放置⼀年以上的⽢油菌需活化后送样
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- 客⼾提供质粒：质粒量≥5μg
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- 菌液和液态质粒均需冰袋运输
最终交付Deliverables
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- 剩余质粒
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- 阴、阳对照及2个单分⼦阴性对照各拍1个视野，实验组5个视野，每个视野包含YFP、Bright field、Merge共3张图
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- 结题报告以及全部原始数据
服务说明Service Content
1、可根据样本物种类型选择在293T细胞还是在烟草中进行验证，以烟草为例，分组如图所示；
2、判定实验成功的标准：阳性对照有荧光，且阴性对照无荧光；
3、在阴阳对照正常的前提下，若实验组检测到荧光，说明两个蛋白能够互作，反之说明不互作。
| 服务名称 | 服务内容 | 交付内容及标准 | 服务周期(工作日) |
| 烟草叶片BIFC | 质粒提取 | 返还目的基因剩余质粒 | 20 |
| 注射烟草 | 默认做1个阳性对照，3个阴性对照，1个实验组，共5组 | ||
| 拍摄照片 | 阴、阳对照及2个单分⼦阴性对照各拍1个视野，实验组5个视野，每个视野包含YFP、Bright field、Merge共3张图 | ||
| 293T细胞BIFC | 无内毒素质粒提取 | 返还目的基因剩余质粒 | 20 |
| 293T细胞转染 | 默认做1个阳性对照，3个阴性对照，1个实验组，共5组 | ||
| 拍摄照片 | 阴、阳对照及2个单分⼦阴性对照各拍1个视野，实验组5个视野，每个视野包含YFP、DAPI、Bright field、Merge 共4张图。 |
联系方式CONTACT US
常见问题FAQ
Q1：如何确保BiFC实验中检测到的荧光信号反映的是真实的蛋白质相互作用？
Q2：BiFC实验中检测到的荧光信号较弱，如何优化？
Q3：BiFC实验中没有检测到荧光信号，可能的原因是什么？
Q4：BiFC技术对实验条件有哪些特殊要求？