PRIMERNA · Yeast One-Hybrid
酵母单杂交

酵母单杂交(Yeast One-Hybrid)是一种用于研究蛋白质与DNA序列之间相互作用的实验技术。它结合了酵母细胞内的转录激活和检测系统,用于筛选和鉴定与给定DNA序列相互作用的蛋白质,具有高通量筛选、生理相关性、较低的假阳性率、定量分析能力以及适用于多个研究领域的优势。

服务概述Service Overview
酵母单杂交技术是在酵母双杂基础上发展而来的一种研究核酸-蛋白相互作用的工具,被广泛用于研究真核细胞内基因的表达调控,如鉴别DNA结合位点发现潜在的结合蛋白基因、分析DNA结合结构域信息等。
服务优势Service Process
  • 一站式辅助检测手段
    手段方便快捷,得到可靠的实验结论
  • 多年文库构建经验
    4种优化的Total RNA提取技术方案可以有效保证Total RNA的纯度和完整性,保证样本的多样性
  • 可同时研究多个蛋白质相互作用
    实现高通量筛选和分析,快速获得大量相互作用信息
  • 采用多个筛选步骤
    如报告基因的验证和双重选择,减少非特异性相互作用的误报
客户提供Sample Requirements
  • 01
    物种信息,样本类型
  • 02
    基因序列信息
  • 03
    实验目的
最终交付Deliverables
  • 文库菌液,文库质粒
  • 高通量蛋白质组学分析(GO及KEGG功能注释)
  • 原始数据及结果图片
服务流程Service Process

酵母单杂交文库筛选:

1
酵母单杂交文库筛选
2
接收订单及样品
3
诱饵载体及诱饵菌株构建
4
自激活检测
5
文库筛选
6
阳性克隆菌株鉴定
7
结果交付

酵母杂交⽂库构建:

1
总RNA提取
2
mRNA分离及纯化
3
双链cDNA合成及纯化
4
自双链cDNA与载体融合
5
⼤肠文库菌液
6
文库质粒

酵母杂交验证:

1
诱饵,猎物重组质粒构建
2
诱饵⾃激活及毒性验证
3
酵⺟细胞共转验证
4
稀释点钟验证
服务项目Service Content

服务项目

客户提供

最终交付

酵⺟杂交⽂库构建infusion同源重组

 

组织/细胞

1) DH10B⼤肠⽂库菌液10mL, OD值 0.5-0.7, 满 ⾜ 滴 度

>1×10^7, 插⼊率>95%, 平均⽚段⻓度>1000bp(若物种本⾝⽚段较短,该指标可做调整);

2) ⽂库质粒500μL, 浓度>1ug/μL

酵⺟杂交⽂库构建-Gateway

组织/细胞

1) 交付初级⼤肠⽂库菌液2mL,次级⼤肠⽂库菌液6 mL,初级⽂库质粒200ug,次级⽂库质粒400ug,插⼊率>95%,平均⽚段⻓度>1000bp(若物种本⾝⽚段较短,该指标可做调整);

2)完整的结题报告,内含建库过程中的原始图⽚及原始数据

文库筛选

蛋白序列/基因序列/质粒

筛选过程中的全部原始图片;筛选获得所有相互作用的猎物蛋白的测序结果

酵母单杂交验证

酵母菌株,DNA诱饵样本蛋白,蛋白表达样本

完整版:交付结题报告及原始数据(包含⾃激活,共转化及稀释点种的原始图⽚)

简易版:交付结题报告及原始数据(只包含稀释点种原始图⽚)

实验结果验证Result Validation
服务内容

实验目的

细分 周期(工作日)
EMSA 验证启动子和蛋白互作

探针合成及标记

10

EMSA实验

20
双荧光素酶检测 验证启动子和蛋白互作

载体构建

10-15

双荧光素酶检测

25
联系方式CONTACT US
SUNYUAN BIO
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